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昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的重要點(diǎn)介紹
點(diǎn)擊次數(shù):480 更新時(shí)間:2023-09-05

  細(xì)胞培養(yǎng)作為很多實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ),在生物工程領(lǐng)域的重要性不言而喻?,F(xiàn)在,隨著昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)(BEVS)的廣泛應(yīng)用,昆蟲細(xì)胞的體外培養(yǎng)也越來越受到重視。從1915年,昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)起始,經(jīng)過一百多年的發(fā)展,已在細(xì)胞、分子、醫(yī)學(xué)等方向廣泛應(yīng)用。目前,常用于培養(yǎng)的昆蟲細(xì)胞以草地貪夜蛾細(xì)胞株Sf9和Sf21,以及粉紋夜蛾細(xì)胞株Tn5B1-4(商品名High Five)為主。

  下面遠(yuǎn)慕以Sf9為例,具體講解一下昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的要點(diǎn):

  細(xì)胞基本信息:

  Sf9昆蟲細(xì)胞系來自雌性草地貪夜蛾卵巢組織,是利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組蛋白表達(dá)的合適宿主。雖然以往人們利用由培養(yǎng)瓶和含血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成的靜止培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng),但是一般而言昆蟲細(xì)胞并無貼壁依賴性,更適于進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。

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  細(xì)胞特性:

 ?。?)細(xì)胞靜置培養(yǎng)時(shí)半貼壁生長,也可以使用搖瓶懸浮培養(yǎng);

  靜置培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞會(huì)大量附著瓶底生長,呈半貼壁狀態(tài),會(huì)有少部分細(xì)胞懸浮生長;搖瓶培養(yǎng)時(shí)可以很快適應(yīng)懸浮生長,呈單個(gè)或小聚團(tuán)懸浮生長。

  (2)對(duì)溫度極為敏感;

  細(xì)胞需盡量控制在26~28℃培養(yǎng),以保證細(xì)胞生長狀態(tài);若溫度低于26℃,細(xì)胞生長速度會(huì)變慢,但恢復(fù)溫度后生長速度會(huì)逐漸恢復(fù),不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生過大傷害;若溫度28℃~30℃,細(xì)胞生長嚴(yán)重受限;若溫度高于30℃,細(xì)胞將受到不可逆?zhèn)?,即使溫度恢?fù)也無法恢復(fù)正常生長狀態(tài);同時(shí)注意使用的培養(yǎng)基、PBS及其他試劑應(yīng)保持室溫(最好26~28℃),另外盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)和時(shí)間。

 ?。?)細(xì)胞可以適應(yīng)多種培養(yǎng)體系。

  該細(xì)胞多用于真核細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng),因此針對(duì)該細(xì)胞有諸多培養(yǎng)體系,例如Grace's Insect Medium、SF900 II、TNM-FH、ESF921等培養(yǎng)體系,包括含血清的培養(yǎng)體系和不含血清的培養(yǎng)體系,可以根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)需要選擇逐步更換為合適的培養(yǎng)體系。

  昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng):

  昆蟲細(xì)胞傳代/凍存/復(fù)蘇的一般步驟與哺乳動(dòng)物細(xì)胞相同,但有些關(guān)鍵點(diǎn)又有所不同。

 ?。?)昆蟲細(xì)胞應(yīng)于28°C、非濕化環(huán)境中培養(yǎng)。培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時(shí)建議不要進(jìn)行CO2交換,所以培養(yǎng)瓶選擇密閉蓋;

 ?。?)使用昆蟲細(xì)胞專用的培養(yǎng)基;

 ?。?)貼壁昆蟲細(xì)胞:細(xì)胞密度低于匯合狀態(tài)的20%時(shí),細(xì)胞生長會(huì)受到抑制。健康狀態(tài)最hao的細(xì)胞是對(duì)數(shù)期收獲的細(xì)胞,故昆蟲細(xì)胞應(yīng)在對(duì)數(shù)期傳代。但是,如果培養(yǎng)的是強(qiáng)貼壁性昆蟲細(xì)胞,則應(yīng)在細(xì)胞達(dá)到匯合狀態(tài)或者剛剛開始從培養(yǎng)瓶底部脫離時(shí)進(jìn)行傳代,因?yàn)榇藭r(shí)細(xì)胞容易脫離;

  (4)某些昆蟲細(xì)胞系可能需要一定的過程來適應(yīng)懸浮培養(yǎng)。進(jìn)行細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時(shí)無需更換培養(yǎng)基。定期傳代時(shí)需要吸出細(xì)胞懸液,然后加入適量培養(yǎng)基,將細(xì)胞稀釋到適當(dāng)?shù)拿芏?。添加新鮮培養(yǎng)基后可使細(xì)胞營養(yǎng)素達(dá)到wan全補(bǔ)充;

 ?。?)貼壁昆蟲細(xì)胞在無血清培養(yǎng)條件下,昆蟲細(xì)胞與基質(zhì)貼附極為牢固,需要花費(fèi)較大力氣才能使其脫落。要使細(xì)胞脫落,最佳的方法是蓋緊瓶蓋,并以瓶蓋朝上的方向抓住培養(yǎng)瓶,在臺(tái)面上以中等力量敲擊瓶底2~3次,這樣將會(huì)有足夠的細(xì)胞解離下來用于傳代。

  注意:

  千萬不要?jiǎng)×覔u晃培養(yǎng)瓶,昆蟲細(xì)胞對(duì)吹打、氣泡等機(jī)械損傷非常敏感,若吹打力度過大、氣泡過多將嚴(yán)重影響細(xì)胞生長狀態(tài),甚至造成細(xì)胞損傷。

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