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氧合血紅蛋白簡介與測定方法
點擊次數(shù):800 更新時間:2023-03-06

血紅素鐵原子為二價與O2、卟啉的4個N,與珠蛋白的組an酸殘基(咪唑)結(jié)合,成為八面體的絡(luò)合物結(jié)構(gòu)。它與游離的血紅蛋白不同,是低自旋(spin)物質(zhì),吸收光譜也類似細胞色素還原型。氧分壓和氧合血紅蛋白的生成百分率(%)的圖即結(jié)合曲線(解離曲線),由于血紅素間的相互作用的變構(gòu)(alloste-ric)效應(yīng)而呈S型。氧合血紅蛋白的酸性比血紅蛋白強,生成時放出H+,將此稱為庫效應(yīng)??梢哉J為,它在肺中與氧結(jié)合并放出二氧化碳;在組織中在乳酸的生成與氧的游離的相互關(guān)系具有意義。

血紅蛋白測定

(一)檢測原理血液中血紅蛋白以各種形式存在,包括:氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白(Hi)或其他衍生物。采用比色法測定,包括:氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白(SDS)測定法、疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)法、堿羥血紅蛋白法、溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血紅蛋白測定法等。

1.HiCN測定法原理:血液中除硫化血紅蛋白(SHb)外的各種Hb均可被高鐵qing化鉀氧化為高鐵血紅蛋白,再和CN一結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色復合物-氰化高鐵血紅蛋白,其在540nm處有一吸收峰,用分光光度計測定該處的吸光度,經(jīng)換算即可得到每升血液中的血紅蛋白濃度,或通過制備的標準曲線查得血紅蛋白濃度。

2.SDS測定法原理:血液中除SHb外的各種Hb均可與低濃度SDS作用,生成SDS-Hb棕紅色化合物,其吸收曲線波峰在538nm,波谷在500nm,肩峰在560nm,用分光光度計測定波峰處吸光度,經(jīng)換算可得到每升血液中的血紅蛋白濃度。

(二)方法學評價

1.HiCN法:1966年被ICSH推薦為參考方法。該法具有操作簡單、顯色快、結(jié)果穩(wěn)定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優(yōu)點。其致命的弱點是qing化鉀(KCN)試劑有ju毒,使用管理不當可造成公害。

2.SDS測定法:該法具有操作簡單、呈色穩(wěn)定、準確性和精確性符合要求、無公害等優(yōu)點。但由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認,不能直接用吸光度計算Hb濃度,而且SDS試劑的質(zhì)量差異較大會影響檢測結(jié)果。

3.HiN3測定法:該法優(yōu)點與HiCN測定法相似,最大吸收峰在542nm,顯色快,結(jié)果穩(wěn)定,試劑毒性僅為HiCN測定法的1/7,但仍存在公害問題。

4.堿羥血紅蛋白(AHD575)測定法:該法試劑簡單,呈色穩(wěn)定,無公害,吸收峰在575nm,可用氯化血紅素作為標準品。但儀器多采用540nm左右濾光板,限制了此法使用。

5.CTAB血紅蛋白測定法該法試劑溶血性強又不破壞白細胞,適用于儀器上自動檢測Hb和白細胞。缺點是測定結(jié)果的準確度和精密度不佳。

6.多參數(shù)血細胞分析儀:優(yōu)點是操作簡單、快速,同時可獲得多項紅細胞參數(shù),血紅蛋白測定原理與手工法相似,儀器法測定精度(CV)約為l%。

(三)質(zhì)量控制

1.樣本異常血漿蛋白質(zhì)、高脂血癥、白細胞數(shù)超過30×109/L、脂滴等可產(chǎn)生濁度,干擾Hb測定。

2.采血部位:部位不同,結(jié)果不同,靜脈血比毛細血管血低10%~15%。

3.結(jié)果分析:測定值假性增高的原因是稀釋倍數(shù)不準、紅細胞溶解不當、血漿中脂質(zhì)或蛋白質(zhì)量增加。

4.HiCN參考液:是制備標準曲線、計算K值、校準儀器和其他測定方法的重要物質(zhì)。

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