凍干機適用于大多數(shù)細菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏，但不適于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲等。生物菌種凍干保存步驟，其操作流程如下：

　　1、安瓿管準備

　　安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標簽，標上菌號及時間，加入脫脂棉塞后，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。

　　2、保護劑的選擇和準備

　　保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護劑時，應注意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌；牛奶要先脫脂，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次，每次10-30分鐘，備用。

　　3、凍干樣品的準備

　　在適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期，進行純度檢查后與保護劑混合均勻，分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要濺污上部管壁，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物，應離心去除培養(yǎng)基，然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短，在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預凍。分裝時應注意在無菌條件下操作。

　　4、預凍

　　一般預凍2小時以上，溫度達到-20℃到-35℃左右。

　　5、冷凍干燥

　　采用凍干機進行冷凍干燥。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi)，開始冷凍干燥，時間一般為8-20小時。

　　終止干燥時間應根據(jù)下列情況判斷：

　　安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀；

　　真空度接近空載時的最-高值；

　　樣品溫度與管外溫度接近；

　　選用1-2支對照管，其水份與菌懸液同量，視為干燥完結(jié)；

　　選用一個安瓿管，裝1-2%氯-化鈷，如變深蘭色，可視為干燥完結(jié)；

　　冷凍干燥完畢后，取出樣品安瓿管置于干燥器內(nèi)，備用。

　　6、真空封口及真空檢驗

　　將安瓿管頸部用強火焰拉細，然后采用真空泵抽真空，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。

　　7、保藏

　　安瓿管應低溫避光保藏。

　　8、質(zhì)量檢查

　　冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查，如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。