一、M蛋白的基礎(chǔ)知識
M蛋白是漿細(xì)胞或B淋巴細(xì)胞單克隆大量增殖時所產(chǎn)生的一種異常免疫球蛋白，其氨基酸組成及排列順序十分均一，空間構(gòu)象、電泳特征也*相同，本質(zhì)為免疫球蛋白或其片段（輕鏈、重鏈等）。由于它產(chǎn)生于單一克隆，又常出現(xiàn)于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、惡性淋巴瘤病人的血或尿中，故稱M蛋白。這些M蛋白大多無抗體活性，所以又稱為副蛋白。
M蛋白血癥可分為惡性與意義不明的兩大類。惡性M蛋白血癥多見于多發(fā)性骨髓瘤（包括輕鏈病）、巨球蛋白血癥、重鏈病、7SIgM?。⊿olomen－Konkel?。敕肿硬〖安?骨髓瘤蛋白?。–端基因缺陷）等。意義不明的M蛋白血癥又分為兩種，一種是與其他惡性腫瘤（如惡性淋巴瘤）伴發(fā)者，另一種即所謂良性M蛋白血癥。
M蛋白的檢測方法主要有瓊脂或瓊脂糖電泳、免疫電泳、免疫固定電泳、選擇免疫電泳等。
二、M蛋白的鑒定
1.多發(fā)性骨髓瘤與巨球蛋白血癥時的M蛋白檢測和鑒定
（1）血清總蛋白定量。90%的患者血清總蛋白含量升高（70%的患者＞100g／L），約10%的患者正常或甚至偏低（如輕鏈病時）。
（2）血清蛋白醋纖膜或瓊脂糖電泳。M蛋白在電泳時出現(xiàn)典型的單株峰（亦稱M區(qū)帶），特點是區(qū)帶窄而濃，掃描時呈現(xiàn)尖高峰，在γ區(qū)高比寬≥2，在β區(qū)≥1.此M區(qū)帶可因Ig的不同而出現(xiàn)在在γ～α2的任何區(qū)域。M蛋白增殖的另一特點是其他各區(qū)帶明顯減少，顯示圖像較簡單。有時有的患者血中M蛋白并不高，這是由突變細(xì)胞的Ig分泌能力決定的。這種病人的血清在電泳時M峰可不明顯，易被其他蛋白掩蓋，需采用稀釋血清成應(yīng)用其他敏感方法如免疫固定電泳來檢測。
（3）血清Ig定量。一般M蛋白所屬Ig含量均顯著增高，其他類Ig則正?；蝻@著減低。
（4）免疫電泳。
①正常人血清免疫電泳結(jié)果：可分辨出20多種蛋白成分。在陽ji端有船形很濃的沉淀線為白蛋白。通常Ig組分靠陰ji端，最靠近加樣孔者為IgM，依次為IgA、IgG，三者成平滑的連續(xù)沉淀線。
②多發(fā)骨髓瘤：多發(fā)性骨髓瘤分IgG、IgA、IgM、IgI）和IgE5種，IgG和IgA又分亞類，所有Ig的輕鏈又分兩個型。因此，免疫電泳時變形沉淀線的位置隨各分子的電泳區(qū)帶不同而異，從慢γ～β2區(qū)皆可出現(xiàn)。IgG1多出現(xiàn)在慢γ區(qū)，IgG4在β～α2區(qū)。M蛋白與相應(yīng)的抗重鏈血清、抗輕鏈血清形成遷移范圍十分局限的濃密的沉淀弧。由于此種病人血清中Ig含量甚高，免疫擴散時可出現(xiàn)抗原絕對過剩而不出現(xiàn)沉淀線，此時需稀釋血清重做，往往可獲得滿意結(jié)果。③巨球蛋白血癥：由于IgM分子大量增殖所致。在免疫電泳時，常常出現(xiàn)以下特征：一是沉淀線明顯變形。正常情況下，IgM形成短小沉淀線，不易看到變形。當(dāng)IgM大量出現(xiàn)時，則會使整個IgM沉淀線變形。二是抗原孔周圍和電泳縱軸出現(xiàn)團塊狀沉淀。三是電泳時IgM組分無遷移，這多是IgM分子聚合，電泳不移動所致。
（5）尿本－周蛋白檢測。
①定性檢測：用熱沉淀法和磺基水楊酸法。
②免疫電泳法：用待檢尿濃縮后進行免疫電泳，大多數(shù)多發(fā)性骨髓瘤病人和輕鏈病患者，僅出現(xiàn)一條致密的弓形彎曲的沉淀線。本法60%～80%的骨髓瘤病人和幾乎全部輕鏈病病人可檢出尿本周蛋白。
③輕鏈白蛋白－戊2醛交聯(lián)免疫電泳法：多發(fā)性骨髓瘤、華氏巨球蛋白血癥及輕鏈病可呈陽性，正常人陰性。本法尿本周蛋白檢出率為100%，假陽性4%，尿中含有200μg／ml時即可出現(xiàn)陽性結(jié)果。
2.重鏈病時M蛋白檢測與鑒定
與多發(fā)性骨髓瘤相同，免疫電泳時由于重鏈分子較Ig分子小，故遷移率快，電泳位置較靠陽極側(cè)（β～α）。但重鏈病一般需選擇免疫電泳證實。
3.7SIgM病時M蛋白的檢測與鑒定
一般IgM為五聚體，沉降系數(shù)為19S，而7SIgM患者的IgM為單體，沉降系數(shù)為7S.證明7SIgM有兩種方法：一種是在測定IgM總量后，將被測血清1～2ml過Sepharose6B柱，再根據(jù)洗脫峰圖用面積儀測出7SIgM占總IgM的百分比，與IgM總量換算即得7SIgM的絕對值。另一方法即為植物血凝素（PHA）選擇電泳。此法原理是五聚體IgM可與PHA結(jié)合形成沉淀，而單體IgM不與PHA結(jié)合。在瓊脂膠中加入PHA，后進行電泳，五聚體IgM被PHA所阻留，而7SIgM繼續(xù)向陽極泳動，并可與隨后加至抗體槽中的IgM抗血清反應(yīng)，形成單一沉淀弧。
4.半分子病時M蛋白檢測與鑒定
所謂半分子?。╤alf－molecule）是指此種M蛋白由一條重鍵和一條輕鏈組成，分子量是正常Ig分子的1／2或＜1／2（因半分子病肽鏈往往有部分缺失）。至今報告過IgG和IgA的半分子病。除上述檢測方法外，尚須對“半分子"進行特殊鑒定。方法有：
①免疫電泳法鑒定半分子M蛋白的遷移率。電泳時發(fā)現(xiàn)具有IgG或IgA的電泳特征而遷移率明顯快于二者時（泳向正極可達α2區(qū)），應(yīng)注意有無本病的可能。
②十二烷基硫酸鈉（SDS）－聚丙烯/酰胺凝膠電泳，推算M蛋白的分子量。
③超速離心分析，測定M蛋白的沉淀系數(shù)。
④Fc抗原決定簇的確定。用相應(yīng)抗重鏈血清對比患者與正常人相應(yīng)Ig的區(qū)別。
5.測定免疫球蛋白輕鏈型篩選M蛋白
正常人有五類免疫球蛋白，其輕鏈有兩種型，即κ型或λ型。對于每個Ig分子而言，其輕鏈只有一種，不是κ就是λ。但對一個體的Ig分子而言，則有κ和λ兩種鏈型，且其比例基本上是固定的，即κ／λ約為2∶1.任何原因引起的Ig分子多克隆增殖，如慢性肝病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、某些惡性腫瘤時，其κ／λ值不變。而M蛋白發(fā)生時，是單克隆細(xì)胞的惡性增殖，所以在Ig量明顯增高的同時，其κ醫(yī)學(xué)教育|網(wǎng)搜集整理／λ比值必然發(fā)生改變，即一種輕鏈型的Ig分子增多。利用適當(dāng)?shù)姆椒ǎ謩e定量測定血清中κ、λ型Ig分子的量，即可特異而簡便地診斷M蛋白病。測定方法有兩種，一是用濁度測定技術(shù)分別測定含κ或λ的Ig的量，一種是用單相免疫擴散法測定κ型、λ型Ig的含量及比值。單擴法是在瓊脂凝膠板上打孔，排列呈梅花型，中心孔注入抗κ、抗λ混合抗體，周圍孔放正常人及患者待測血清，然后進行擴散。正常血清與抗血清之間可見對稱雙線。若患者的κ輕鏈Ig升高，其沉淀線向內(nèi)移，而λ線有不同程度向外移，雙環(huán)間距增寬。若λ輕鏈Ig含量增高，則表現(xiàn)為環(huán)距減小、融合或跨環(huán)現(xiàn)象。此外，該法對IgG、IgA、IgD類型的輕鏈診斷準(zhǔn)確率較高，而對IgM型診斷不夠理想，其原因是IgM分子大，擴散遷移率小，同時五聚體立體結(jié)構(gòu)也影響了抗輕鏈抗體與輕鏈結(jié)合。若用二疏基乙醇處理將IgM解為單體，則陽性率大大提高。
6.良性M蛋白血癥
良性M蛋白血癥主要指那些血清中存在電泳均質(zhì)的免疫球蛋白或其片段，但無臨床癥狀，長期觀察也未發(fā)現(xiàn)骨髓瘤或世球蛋白血癥的病人。老年人中發(fā)現(xiàn)良性M蛋白血癥者較多，應(yīng)注意與多發(fā)性骨髓瘤相鑒別。
