【原理】
 

　　瓊脂糖(agarose)是經(jīng)過挑選，以質(zhì)地較純的瓊脂(agar)作為原料而制成的。瓊脂在化學(xué)上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復(fù)合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖，它具有離子交換性質(zhì)，這種性質(zhì)會(huì)給電泳及凝膠過濾以不良的影響。瓊脂糖是直鏈多糖，它由D-半乳糖和3,6-脫水-L-半乳糖的殘基交替排列組成。
 

　　瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時(shí)因凝膠含水量大(98-99%)，近似自由電泳，因?yàn)楣腆w支持物的影響少，故電泳速度快，區(qū)帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團(tuán)，電滲影響很少，是一種較好的電泳材料，分離效果較好。
 

　　血清中脂類物質(zhì)與血清載脂蛋白結(jié)合成水溶性的脂蛋白(lipoprotein)形式存在。各種脂蛋白中所含載脂蛋白的種類及數(shù)量不同，各種脂蛋白顆粒大小也相差很大，因此，以瓊脂糖凝膠為支持物，在電場(chǎng)中可使各種脂蛋白顆粒分離開來。
 

　　瓊脂糖凝膠電泳分離血清蛋白方法簡(jiǎn)單。將血清脂蛋白用脂類染料蘇丹黑(或油紅等)進(jìn)行預(yù)染。再將預(yù)染過的血清加樣于瓊脂糖凝膠板加樣槽中，通電后可以看到脂蛋白向正極移動(dòng)，并分離出幾個(gè)區(qū)帶。
 

　　正常人血清脂蛋白可出現(xiàn)三條區(qū)帶，從陰極到陽(yáng)極依次為β-脂蛋白(最深)，前β-脂蛋白(最淺)及α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些)，在原點(diǎn)處應(yīng)無乳糜微粒。有時(shí)前β-脂蛋白也顯
 

　　示不出來。
 

　　瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時(shí)因凝膠含水量大(98-99%)，近似自由電泳，因?yàn)楣腆w支持物的影響少，故電泳速度快，區(qū)帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團(tuán)，電滲影響很少，是一種較好的電泳材料，分離效果較好。
 

　　血清中脂類物質(zhì)與血清載脂蛋白結(jié)合成水溶性的脂蛋白(lipoprotein)形式存在。各種脂蛋白中所含載脂蛋白的種類及數(shù)量不同，各種脂蛋白顆粒大小也相差很大，因此，以瓊脂糖凝膠為支持物，在電場(chǎng)中可使各種脂蛋白顆粒分離開來。
 

　　瓊脂糖凝膠電泳分離血清蛋白方法簡(jiǎn)單。將血清脂蛋白用脂類染料蘇丹黑(或油紅等)進(jìn)行預(yù)染。再將預(yù)染過的血清加樣于瓊脂糖凝膠板加樣槽中，通電后可以看到脂蛋白向正極移動(dòng)，并分離出幾個(gè)區(qū)帶。
 

　　正常人血清脂蛋白可出現(xiàn)三條區(qū)帶，從陰極到陽(yáng)極依次為β-脂蛋白(最深)，前β-脂蛋白(最淺)及α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些)，在原點(diǎn)處應(yīng)無乳糜微粒。有時(shí)前β-脂蛋白也顯示不出來。
 

　　【操作】
 

　　1、預(yù)染血清 血清 0.2mL中加蘇丹黑染色液0.2mL，混合置37℃水浴中染色30分鐘，離心(2000轉(zhuǎn)/分)約5分鐘。以除去懸浮于血清中染料沉渣。
 

　　2、制備瓊脂糖凝膠板 將已配制好的0.5%瓊脂糖凝膠于沸水浴中加熱融化，用吸管吸取凝膠溶液澆注在載玻片上，約3 mL。靜置半小時(shí)后凝固(天熱時(shí)需延長(zhǎng)，也可放入冰箱中數(shù)分鐘以加速凝固)。
 

　　3、點(diǎn)樣 將剪好的濾紙條對(duì)折，以折邊在距凝膠一端2cm處切一點(diǎn)樣口。將毛細(xì)管插入預(yù)染好的血清中，待吸入部分血清后，取毛細(xì)管使其有樣品的一端靠于點(diǎn)樣口端部，?？?秒左右。
 

　　4、電泳 將凝膠板平放入電泳槽中，使加樣端接在陰極一側(cè)，用四層濾紙或紗布做成“引橋”，敷于膠板的兩端，各搭住凝膠板約1cm左右，“引橋”的另一端浸于電泳槽內(nèi)的巴-比妥緩沖液中。接通電源，首先調(diào)節(jié)電流為3-4mA/凝膠板，電泳10-15分鐘；然后調(diào)節(jié)電流為6-7mA/凝膠板，電泳30-40分鐘，即可觀察到分離的區(qū)帶。
 

　　5、如果需要保留電泳圖譜，可將電泳后的凝膠板(連同載玻片)放入清水中浸泡脫鹽2小時(shí)，然后放烘箱(80℃左右)中烘干即可。
 

　　【試劑】
 

　　1、蘇丹黑染色液 將蘇丹黑B加到無水乙醇中至飽和，搖蕩使乙?；?。用前過濾。
 

　　2、巴比-妥緩沖液 稱取巴比-妥鈉15.4g、巴-比妥2.76g及 EDTA0.29g，加水溶解后再加蒸餾水至1000mL(pH為8.6，離子強(qiáng)度0.075)，為電極緩沖液。
 

　　3、凝膠緩沖液 取三羥甲基氨基甲烷1.212g、EDTA0.29g及NaCl5.85g，用蒸餾水溶解后，稀釋至1000mL，pH為8.6。
 

　　4、瓊脂糖凝膠 稱取瓊脂糖0.45 g溶于50 mL凝膠緩沖液中，再加水 50 mL。在水浴中加熱至沸，待瓊脂糖*溶解后，立即停止加熱。
 

　　【注意事項(xiàng)】
 

　　1、電泳樣品應(yīng)為新鮮的空腹血清。
 

　　2、加熱溶化瓊脂時(shí)，須防止水份蒸發(fā)過多。瓊脂糖凝膠最好隨用隨制，以免凝膠表面干燥，影響分離效果。
 

　　3、制作凝膠板時(shí)瓊脂糖濃度一般選用0.5%左右為宜，高于1%以上α-脂蛋白部分較緊密，β和前β-脂蛋白部分不夠清晰；低于4.5%則凝固性較差，圖譜不清。
 

　　4、點(diǎn)樣口要大小適宜，邊緣整齊、光滑，否則會(huì)影響電泳圖譜。
 

　　5、在α-脂蛋白前若出現(xiàn)較淺區(qū)帶，可列為前α-脂蛋白。
 

　　【正常參考范圍】
 

　　α-脂蛋白 20~30%
 

　　β-脂蛋白 20~30%
 

　　前β-脂蛋白 0~28%
 

　　乳糜微粒(-)