核酸電泳的指示劑與染色劑
點(diǎn)擊次數(shù)：1493 更新時(shí)間：2021-03-29
指示劑
核酸電泳常用的指示劑有溴酚蘭和二甲-苯青及銀染色.溴酚蘭在堿性液體中 呈紫蘭色，在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中，溴酚蘭的遷移率分別與1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA/片段大致相同.二甲-苯青的水溶液呈蘭色，它在 1%和1.4%瓊脂糖中電泳時(shí)，其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似.
指示劑一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖400組成載樣緩沖液.載樣緩沖液的作用有①增加樣 品密度，使其比重增加，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi).②在電泳中形成肉眼可見的指 示帶，可預(yù)測核酸電泳的速度和位置.③使樣品呈色，使加樣操作更方便.
染色劑
核酸電泳后，需經(jīng)染色后才能顯現(xiàn)出帶型，蕞常用的是溴化乙錠染色法，其 次是銀染色.
溴化乙錠(ethidium bromide，EB)是一種熒光染料，EB分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對 之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出紅色熒光.根據(jù)情況可在凝膠電泳液中加入終濃度為 0.5ug/ml的EB，有時(shí)亦可在電泳后，將凝膠浸入該濃度的溶液中染色10～15min.瓊脂 糖凝膠EB染色，肉眼可見核酸電泳帶，其DNA量一般>5ng，當(dāng)溴化乙錠太多，凝膠染 色過深，核酸電泳帶看不清時(shí)，可將凝膠放入蒸餾水浸泡30min后再觀察.
銀染色液中的銀離子(Ag )可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物，然后用還原劑如甲醛 使Ag 還原成銀顆粒，可把核酸電泳帶染色黑褐色.主要用于聚丙烯-酰胺凝膠電泳染色. 也用于瓊脂糖凝膠染色.其靈敏度比EB高200倍.但銀染色后，DNA不宜回收.
