抗原修復就是利用虎穴試劑盒熱的作用將抗原重新暴露出現(xiàn)或修正過來的過程。
常用抗原修復法介紹：
1. 真空負壓抗原修復法：
① 切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇真空負壓處理5分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），真空負壓干燥箱預先調至95℃，真空負壓處理10分鐘。
⑤待修復注降至室溫的一，PBS洗3次，隨后按選好的年免疫組化染色方法進行染色。這是一種操作簡單，效果特佳，溫度恒定，能一次性處理大量切片的方法。
2.微波輻射抗原修復法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④ 0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），于微波爐內微波輻射10分鐘，如檢測Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。
⑤待修復液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學的染色方法進行染色。
3.高壓抗原修復法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④切片放入抗原修復液中，邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續(xù)1－4分鐘。
⑤待修復液恢復至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學染色方法進行染色。
4.隔水熱抗原修復法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④切片放入0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0）中，邊同容器一起放入水溶鍋中加熱，其間應不斷用溫度計測其溫度，待抗原修復液的溫度達到有效溫度后（92℃↑）。即開始計時，持續(xù)40分鐘。⑤待抗原修復液恢復至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定好的免疫組化染色方法進行染色。
5.電爐加熱抗原修復法：
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗，蒸餾水洗。
④ 將切片放入抗原修復液中于電爐上加熱，不時用溫度計測量溫度，當達92℃后，即可拔離電源，當溫度低于92℃時，再插上電源，如此反復持續(xù)至10分鐘左右。
⑤待抗原修復液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定的免疫組化染色方法進行染色。對各種抗原修復方法的評價。
抗原修復的方法選擇：
抗原修復關系到組織抗原能否暴露充分，這對免疫組化染色效果有很大影響。不適當?shù)目乖迯头绞綍е氯旧蹶栃?。因此應當根據不同的抗原特點，采用不同的修復方法。不適當?shù)目乖迯头绞綍е氯旧蹶栃浴Ｒ虼藨敻鶕煌目乖攸c，采用不同的修復方法。對某些細胞內抗原（如Fas、Bax、FⅧ等）和細胞間質抗原（如Laminin、CoIV等）則需要用酶消化法處理切片。用于IHC消化的酶很多，所選酶的種類，使用的濃度，PH值，消化時間及溫度等均要視組織固定的不同，所檢測抗原的性質、組織類型的不同而異，應通過預實驗摸索定。使用酶消化的原則：胰蛋白酶和蛋白酶K一般用于細胞內抗原，如Keratin，CEA，GFAP等。一般說來，胰蛋白酶消化能力較胃蛋白酶弱，主要用于細胞內抗原的消化，胃蛋白酶主要用于細胞間抗原的消化，如fibronectin，Laminin，各型膠原等。消化時間和組織固定的長短呈正比。在用酶消化，熱修復后均不能獲得結果的前提下使用抗原修復與酶消化結合的方法，有時會取得較為滿意的結果。一般蛋白酶K和微波相結合，但應注意，可能檢測的抗原無論何種性質均會在核內出現(xiàn)假陽性反應。以高壓加熱方法、微波加熱方法較為穩(wěn)定,?高壓加熱方法效果優(yōu)于微波加熱方法和單純加熱方法。溶液的濃度對修復效果無任何影響，而PH值則影響較大。緩沖液以檸檬酸緩沖液和Tris-HCL較常用。
免疫組化抗原修復法的注意事項：
1、pH的應用范圍及選擇抗原修復液的pH非常重要，有效的抗原修復pH要比修復液的化學成分更重要，同樣的修復液隨著pH的升高染色的強度逐漸增強，但jiapH范圍為6.0-10.0。目前大家*的hao的抗原修復液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復液堿性pH的修復液要比酸性的有效，而對固定很長時間舊的存檔組織，酸性pH的修復液則優(yōu)于堿性的修復液。
2、抗原修復時應選擇jia溫度70-90℃的溫度對未經固定的蛋白質可發(fā)生變性，但經福爾馬林固定的蛋白質，溫度必須達到92℃以上方能使其變性。研究結果顯示，溫度為92-98℃是合適的，95℃效果hao。
3、抗原修復液必須遵循自然降溫規(guī)律，否則效果不好或達不到抗原修復的目的抗原修復持續(xù)時間過后，取出放于室溫中讓其慢慢地降溫，不能為了爭取時間，強行用冰塊或冷水使其降溫。這是因為當高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯(lián)結，要有一個自然環(huán)境讓其自然放松下來，隨著溫度的降低，它們會慢慢地恢復原來的形態(tài)和構型。
4、盡量使用足量的抗原修復液應用于抗原修復的液體，一定要充足，防止切片干涸。應用大量的抗原修復液時，由于它的量較大，可延緩液體的沸騰時間，增加切片受微波輻射的量，對抗原修復將達到*。
