酶聯(lián)免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法，與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、確和靈敏度高等特準點，但對實驗操作條件的要求比較嚴格。實驗條件主要由實驗室的操作環(huán)境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但EIA試劑盒對實驗室操作環(huán)境的要求是幾種藥物殘留 LS檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的，人為的誤差相對嚴重一些。本人結(jié)合幾年的工作實踐介紹一下進行ELISA實驗操作的時候應(yīng)該注意的問題。

酶聯(lián)免疫試劑盒操作的通用的規(guī)則：

1.孵育的時間應(yīng)該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準；

2.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準確性；

3.又能反映出試劑盒的精密度；

4.對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進行；

5.驗證

沒有去離子水或雙蒸水時：

1.可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水；

2.使用試劑盒時出現(xiàn)問題的解決辦法；3.

檢測的結(jié)果沒有吸光度值或吸光度值很低 .可能引起的原因有試劑盒已過有效期、使用的試劑盒內(nèi) 容物不是同一個批次的、加入酶標記物、劑盒的內(nèi)容物沒試；

4.要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子，天平進行確定 (由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為 2%左 0右時，m l L的水可以看作是 l、0 L的水可以看作是 g20 02 )每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程 .g進行確定。

1.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換；

2槍頭，即使吸取標準品溶液。 1吸取液體時速度不易太快；

3.以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不 夠準確。

沒有充分的回溫、孵育的溫度太低等，對應(yīng)的解決辦法是相更換成在有效期以內(nèi)的試劑盒、使用同一個批次的試劑盒的內(nèi)容物、照試劑盒說明書中的步驟進行操作、按將試劑盒的內(nèi)容物充分的回溫后再進行操作、在實驗操作的整個過程中請仔細觀察恒溫箱的溫度。

       標準曲線的線性不好，或平行性不好 ( .雙孔對照孔的 O D值差別很大)或 出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能盡快進行下一步操作、添加樣品或其它試劑時操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標板孔問加入的試劑量不同，對應(yīng)的解決辦法是加相樣時請小心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請小心， 勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、添加試劑時請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、確認孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標板密封好、使用已校正過的微量加樣器，如將*次加入液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑壁接觸， L液滴會自然流下去。吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。