咱們在運用ELISA試劑盒96孔板的試驗測定的時分，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應"，也就是外周孔顯色較基地孔深。經(jīng)研究證真實溫育中的熱力學梯度也許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在試驗室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃擺布）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與基地孔之間也許存在一熱力學梯度。因而運用水浴或在將反響溶液參加至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地掃除“邊緣效應"，而且可進步測定的重復性。

    ELISA試劑盒還有就是在試驗中，必定有運用微量加樣器參加樣本的步驟。提示留意：加樣不行太快，要防止加在孔壁上部，不行濺出和發(fā)生氣泡。ELISA試劑盒太快的話無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易致使非特異吸附。濺出會對附近孔發(fā)生污染。出現(xiàn)氣泡則反響液界面有區(qū)別。所以，有時分一份標本用一樣的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，通常就是上述加樣及試劑的過錯所造成的。

    ELISA試劑盒實驗操作中，須特別注意一些細節(jié)問題，細節(jié)直接影響著試驗的成功與否，以下是ELISA試劑盒實驗八大忌諱，以供各位試驗君參考：

    一、如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先將樣本稀釋必定倍數(shù)（n倍）后再測定，核算時請zui終乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。

    二、ELISA試劑盒從冷躲環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可運用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝進密封袋中保留。

    三、嚴厲依照說明書的操縱進行，ELISA試劑盒實驗成果斷定有必要以酶標儀讀數(shù)為準。

    四、濃洗刷液可能會有結(jié)晶析出，ELISA試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗刷時不影響成果。

    五、本試劑不一樣批號組分不得混用。顯色劑B請避光保留。

    六、ELISA試劑盒一切樣品，洗刷液和各種廢棄物都應按感染物處理。

    七、各步加樣均應運用加樣器，并常常校正其正確性，以避免實驗誤差。一次加樣時刻*控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)目多，引薦運用排槍加樣。

    八、封板膜只限一次性運用，以避免穿插污染。