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【 總RNA提取試劑(Trizol )】特點_簡介說明_操作步驟
點擊次數(shù):3214 更新時間:2018-04-11

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【特點】

RNA完整性好。

純度高,回收率高。

方便快捷,全過程僅需30 min左右。

 

【簡介說明】

本試劑是一種通用的總RNA提取試劑,適用于動植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提,可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交,純化mRNA,體外翻譯,RNase保護實驗,RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。該試劑可用于100次總RNA提取(10平方厘米細(xì)胞或100mg組織)。

 

【操作步驟】

1、樣品處理:

a、植物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。

b、動物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液,用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。

c、貼壁細(xì)胞:直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞,每106細(xì)胞加1ml裂解液。用取樣器吹打混勻。

d、細(xì)胞懸液:離心收集細(xì)胞。每106動物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加1ml裂解液混勻。

e、血液處理:取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細(xì)胞裂解液,混勻后室溫放置10分鐘,10000rpm離心1分鐘。棄上清,若沉淀含有紅細(xì)胞,可加入2倍體積紅細(xì)胞裂解液重復(fù)裂解步驟。離心后沉淀加入1ml裂解液混勻。

2、將處理后的樣品在室溫放置5分鐘,使得核酸蛋白復(fù)合物*分離。

3、向勻漿樣品中加0.2mllv仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩15秒,室溫放置3-5分鐘。

4、2-8℃12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中,把水相轉(zhuǎn)移到新管中,不要吸到沉淀。

5、吸附柱前處理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室溫放置2分鐘,2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。

6、第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻,加入吸附柱靜置2分鐘,2-8℃12000rpm離心2min,棄廢液。

7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。

8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。

9、12000rpm離心2min,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。

10、將吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O,室溫放置5min,12000rpm室溫離心2min即得到RNA。

 

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