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精氨酸-瓊脂糖凝膠4B使用說明書
點擊次數(shù):1325 更新時間:2018-04-02

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【精氨酸-瓊脂糖凝膠4B參數(shù)說明】

中文名:精氨酸-瓊脂糖凝膠4B

英文名:Arginine Sepharose 4B

供應(yīng)商:上海遠慕

級別:BR

配基:精氨酸配基

密度:20-40μmol/ml親和填料

顆粒大?。?5-165μm

zui大流速:300cm/hpH

范圍:3-10,在位清洗時pH范圍可到2-13

使用溫度:4℃~常溫性狀

化學性質(zhì):含20%乙醇,底部為乳白色膠體

用途:精氨酸是堿性氨基酸,把它偶聯(lián)到活化的填料上能用于絲氨酸蛋白酶,凝血因子,血纖維蛋白溶酶原,血纖維蛋白溶酶原激活劑等的親和純化

保存:2~8℃

 

【精氨酸-瓊脂糖凝膠4B操作步驟】

1、裝柱

凝膠過濾介質(zhì)的使用對裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。

以下過程為通用介質(zhì)裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊,接好管路。

讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

選擇一根一定直徑的柱子,長約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。不要劇烈攪動,以免攪壞微球。

將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無氣泡。

用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。

打開蠕動泵,讓緩沖液緩慢流過,使柱床穩(wěn)定。

用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。

2、平衡

讓緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。

3、上樣

樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理,再上樣。

介質(zhì)對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的,分子量大的先流出來。

上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。

4、洗脫

用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

5、再生

一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。

6、注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候,始終要避免柱子流干氣泡進入。

 

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