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【ConA-瓊脂糖凝膠4B】參數(shù)_適用范圍_作用_使用方法_注意事項
點擊次數(shù):3314 更新時間:2018-03-29

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ConA-瓊脂糖凝膠4B參數(shù)說明

中文名:ConA-瓊脂糖凝膠4B

英文名:ConA Sepharose 4B

供應(yīng)商:上海遠慕

規(guī)格:25ml、100ml

操作溫度:4-40℃

結(jié)構(gòu)成分:4%交聯(lián)瓊脂糖

配基偶聯(lián)量:40μmol phenyl/ml 凝膠

保存條件:4℃

性狀:白色微球,凝膠狀,保存在20%酒精溶液中

應(yīng)用:疏水層析介質(zhì),適合含芳香族配體蛋白純化,特別適合單抗的純化等

【ConA-瓊脂糖凝膠4B】參數(shù)說明_適用范圍_作用_使用方法_注意事項

ConA-瓊脂糖凝膠4B適用范圍

ConA瓊脂糖凝膠用于各種帶甘露醇及葡萄糖殘基的糖、糖蛋白、糖脂的分離純化。

 

ConA-瓊脂糖凝膠4B作用

ConA-瓊脂糖凝膠4B是將伴刀豆球蛋白(ConA)偶聯(lián)到交聯(lián)及活化的瓊脂糖凝膠上,該填料具有很高的化學(xué)穩(wěn)定性。ConA能和各類帶甘露醇及葡萄糖殘基的糖、糖蛋白、糖脂,所以ConA瓊脂糖凝膠可以用于這類物質(zhì)的分離純化。

 

ConA-瓊脂糖凝膠4B6FF使用方法

1、乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。

2、無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹。

3、鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性。

4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層。

5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。

6、膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可。

7、洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。

8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

 

ConA-瓊脂糖凝膠4B注意事項

1、該凝膠從冷室或冰箱中取出后在室溫下緩慢振搖恢復(fù)到室溫,然后再裝柱,以免產(chǎn)生氣泡影響柱效。

2、吸附:10-30Tris-HCl緩沖液,pH7.5,其中含有0.2MNaCl,2mMMnCl2,2mMCaCl2。平衡10個柱子床體積。

3、洗脫:可以用pH4.5-6的緩沖液洗脫,也可以用100-500mM糖類競爭線性或階段洗脫,例如用甲基葡萄糖等甲基吡喃糖,其中緩沖液可以是10-30Tris-HCl緩沖液,pH7.5,含有0.2MNaCl.洗脫zui多可以到10個柱床體積。

4、上樣樣品必須與平衡柱子的緩沖液pH、電導(dǎo)相同。

5、ConA瓊脂糖凝膠FF親和填料的再生處理方法:先用0.1MTris-HClpH8.5緩沖液洗含0.2MNaCl洗10個柱床體積,然后用20mM醋酸緩沖液,pH4.5洗3個床體積,zui后用20%乙醇洗3個床體積即可。

6、對于吸附力強的物質(zhì)可以用0.1M硼酸鹽緩沖液,pH6.5低流速洗3-5個柱床體積。也可以用乙醇線性洗脫20-50%。

7、該親和填料保存條件為20%乙醇,+4~8℃。

 

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