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【谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P. 】參數(shù)說明_使用方法_注意事項
點擊次數(shù):1809 更新時間:2018-03-27

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谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P.參數(shù)說明

中文名:谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P.

英文名:Glutathione Sepharose H.P.

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

規(guī)格:10ml、50ml

保存溫度:4-8℃

操作溫度:4-40℃

分離范圍:70,000-40 ×106

凝膠類型:凝膠過濾填料,凝膠層析介質(zhì)

應(yīng)用:蛋白、大分子復(fù)合物、病毒、核酸、多糖的分離、分子量測定。

【谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P. 】參數(shù)說明_使用方法_注意事項

【谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P. 】參數(shù)說明_使用方法_注意事項

 

【谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P. 注意事項】

1、不同配基的偶聯(lián)方法與上面類似,但是反應(yīng)的條件例如:配基加入量,反應(yīng)時間,反應(yīng)溫度應(yīng)根據(jù)配基的不同進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整;

2、可用碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液做為偶聯(lián)緩沖液,但不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的緩沖液。

3、產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20%乙醇),通風(fēng)、干燥、清潔的地方。

4、不能冷凍。

5、用過的柱子貯存在4℃(20%乙醇)。

 

谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法

1、乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;

2、無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;

3、鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;

4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;

5、上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免;難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可;

7、洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;

8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

 

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