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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.使用方法及注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊次數(shù):2028 更新時(shí)間:2018-03-20

上海遠(yuǎn)慕生物詳細(xì)為您講述鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.的使用方法,注意事項(xiàng)及其他參數(shù)等咨訊,本司所供應(yīng)的試劑品種齊全,包含ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品,動(dòng)物血清,培養(yǎng)基,抗體,瓊脂糖凝膠,葡聚糖凝膠,染色液,溶液,緩沖液,實(shí)驗(yàn)耗材,化學(xué)試劑,生化試劑,細(xì)胞株,多肽,其他試劑等,價(jià)格實(shí)惠,歡迎訂購!

 

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.參數(shù)說明

中文名:鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.

英文名:Ni Sepharose H.P.

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

產(chǎn)地:進(jìn)口,國產(chǎn)

工作PH值:3-12

結(jié)構(gòu)成分:6%交聯(lián)瓊脂糖

平均粒徑:34µm

操作溫度:4-30℃

配基基團(tuán):Ni2+

配體密度:15μmol/ml

保存溫度:4℃

凝膠類型:小配體親和色譜填料

性狀:凝膠狀,保存在20%酒精溶液中

應(yīng)用:分離帶His標(biāo)簽的重組蛋白及能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白,高分辨率。

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法及注意事項(xiàng)

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法及注意事項(xiàng)說明

 

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 說明

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 是用于純化6×His標(biāo)簽重組蛋白的一種純化介質(zhì),它是由6%交聯(lián)的Sepharose耦連了一種四齒螯合劑NTA而得;它可用于在非變性或變性條件下純化任何表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的6×His標(biāo)簽重組蛋白。NTA,含有四個(gè)螯合區(qū),較一般的三齒螯合劑能更好的結(jié)合Ni2+;6×His可與Ni2+螯合,從而使His標(biāo)簽蛋白結(jié)合在Ni-NTA純化介質(zhì)上,未結(jié)合的蛋白被洗滌下去,結(jié)合在介質(zhì)上的蛋白經(jīng)過一定濃度的咪唑或低pH緩沖液的溫和洗脫下來,從而得到高純度的目的蛋白;該純化介質(zhì)與His標(biāo)簽蛋白具有*的親和力,可達(dá)5-20 mg/mL??稍诜亲冃院妥冃詶l件下純化任何表達(dá)系統(tǒng)所得的His標(biāo)簽蛋白;純化程序簡單,所得的蛋白純度可高達(dá)95%;Ni-NTA可再生4-6次,重復(fù)使用。本產(chǎn)品懸浮液為20%乙醇,已螯合Ni2+。

 

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 使用方法

1、乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí),并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;

2、無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時(shí),間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;

3、鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時(shí),間隙攪拌,濾干,水洗只中性;

4、將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;

5、上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

6、凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免;難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時(shí)高徑比為5:1即可;

7、洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;

8、在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積,再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

 

鎳-瓊脂糖凝膠 H.P. 注意事項(xiàng)

1、一般都用藥匙取用。藥匙的兩端為大小兩個(gè)匙,分別取用大量固體和少量固體。

2、試劑一旦取出,就不能再倒回瓶內(nèi),鎳NTA瓊脂糖凝膠6FF可將多余的試劑放入容器。

3、稱量的天平應(yīng)保持清潔、干燥,避免潮濕及腐蝕性氣體的侵蝕。在進(jìn)行稱量操作時(shí),被稱取的試劑應(yīng)置于稱量紙上或其它器皿內(nèi),不可在盤中直接稱量。

 

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標(biāo)簽:鎳-瓊脂糖凝膠 H.P.

 

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