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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明書
點(diǎn)擊次數(shù):1421 更新時間:2018-03-16

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丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.參數(shù)說明

中文名:丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.

英文名: Butyl -Sepharose H.P.

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

凝膠類型:疏水層析填料

粒徑: 45-165μm

工作PH值:3-12

操作溫度:4-40℃

結(jié)構(gòu)成分:4%交聯(lián)瓊脂糖

包裝:25毫升/瓶,100毫升/瓶,大包裝

配基偶聯(lián)量:40μmol phenyl/ml 凝膠

保存條件:4℃

性狀:白色微球,凝膠狀,保存在20%酒精溶液中

應(yīng)用:疏水層析介質(zhì),適合含芳香族配體蛋白純化,特別適合單抗的純化等。

丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明書

丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明

 

丁基-瓊脂糖凝膠 H.P.操作步驟

1、裝柱:

a、讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。

c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無氣泡。

d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。

e、打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

2、平衡:

  讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3、上樣:

a、樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。

b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

c、介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng),介質(zhì)對組分吸附牢。

4、洗脫:

疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫;加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫;zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS。

5、再生:

一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用;若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。

6、在位清洗:

a、對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用2MNacl去除。

b、對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,可用1MNaOH去除。

c、對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡;清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7、注意在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。

8、去熱源用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時;或用以下方法步驟去除:

a、2倍柱體積的70%乙醇;

b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;

c、1倍柱體積4M尿素;

d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNacl;上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

9、消毒用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。

特別注意:上樣之前,樣品必須去除色素,否則色素會被吸附到填料上,影響填料的正常使用。

 

 

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