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苯基-瓊脂糖凝膠 H.P.參數(shù)說明
中文名：苯基-瓊脂糖凝膠 H.P.
英文名：Phenyl -Sepharose H.P.
供應商：上海遠慕
規(guī)格：25ml、100ml、500ml
保存： 4-8℃
粒徑：22-44μm
工作PH值：3-13
操作溫度：4-40℃
配基偶聯(lián)量：25μmol phenyl/ml 凝膠
凝膠類型：疏水層析介質
性狀：白色微球，凝膠狀，保存在20%酒精溶液中
應用：疏水層析介質，快流速，適合生物大分子和疫苗的分離純化等。
苯基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明
苯基-瓊脂糖凝膠 H.P.操作步驟
1、裝柱：
a、讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
b、根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。
c、將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務必使底端無氣泡。
d、用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
e、打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2、平衡：
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
3、上樣：
a、樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
b、一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
c、介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強，介質對組分吸附牢。
4、洗脫：
疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫；加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫；zui常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
5、再生：
一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用；若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。
6、在位清洗：
a、對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。
b、對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類，可用1MNaOH去除。
c、對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡；清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7、注意在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。
8、去熱源用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時；或用以下方法步驟去除：
a、2倍柱體積的70%乙醇；
b、2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5；
c、1倍柱體積4M尿素；
d、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNacl；上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
9、消毒用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
特別注意：上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。
苯基-瓊脂糖凝膠 H.P.說明
苯基-瓊脂糖凝膠H.P.是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種可利用疏水相互作用來實現(xiàn)目標產品純化分離的疏水類介質；用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
本品應密封貯存在4℃~30℃(保存溶液為20%乙醇+0.1M醋酸鈉)，通風、干燥、清潔的地方；不能冷凍；用過的柱子貯存在4℃(20%乙醇)；6保質期：5年；苯基-瓊脂糖凝膠H.P.是一種疏水層析介質，利用樣品中組分疏水性的不同進行分離；用于生物大分子的純化分離。
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