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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

瓊脂糖凝膠CL-2B實驗流程
點擊次數(shù):2141 更新時間:2018-03-02

瓊脂糖凝膠CL-2B是在瓊脂糖凝膠2B的基礎(chǔ)上通過交聯(lián)使微球的剛性增強(qiáng),理化性能提高,有利用于工業(yè)生產(chǎn)。該介質(zhì)用于生物大分子的凝膠層析。本品呈白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。

 

瓊脂糖凝膠CL-2B參數(shù)說明

中文名:瓊脂糖凝膠CL-2B

英文名:Sepharose CL-2B

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

規(guī)格:100ml,500ml

分離范圍:70,000~40 ×106

應(yīng)用:蛋白、大分子復(fù)合物、病毒、核酸、多糖的分離、分子量測定

瓊脂糖凝膠CL-2B實驗流程

瓊脂糖凝膠CL-2B

瓊脂糖凝膠CL-2B實驗流程

1、裝柱凝膠過濾介質(zhì)的使用對裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗。以下過程為通用介質(zhì)裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊,接好管路。

a、讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

b、選擇一根一定直徑的柱子,長約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。

c、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無氣泡。

d、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。

e、打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定。用緩沖液平衡柱子,到柱床穩(wěn)定。

f、用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。

2、平衡讓緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。

3、上樣

a、樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理,再上樣。

b、介質(zhì)對樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的,分子量大的先流出來。

c、上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。

4、洗脫用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

5、再生一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。

6、在位清洗

a、對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用2MNacl去除。

b、對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,可用1MNaOH去除。

c、對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7、注意在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。

8、去熱源用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時?;蛴靡韵路椒ú襟E去除:a、2倍柱體積的70%乙醇;b、2倍柱體積50mMTris-HClpH7.5;c、1倍柱體積4M尿素;e、3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNacl;以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

9、消毒用0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。

 

瓊脂糖凝膠CL-2B注意事項

1、產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20%乙醇),通風(fēng)、干燥、清潔的地方。

2、不能冷凍。

3、用過的柱子貯存在4℃(20%乙醇)。

4、本產(chǎn)品避免與氧化劑接觸;避免長時間暴露在空氣中。

5、保質(zhì)期:5年。

 

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