瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

   上海遠(yuǎn)慕生物主營(yíng)產(chǎn)品有ELISA試劑盒、層析色譜填料、標(biāo)準(zhǔn)品、血清、染色液等，如有意向，可與我司銷售。

    注：本公司產(chǎn)品僅供科研使用！

    一、試劑配制
    1.5×TBE緩沖液：450mmol/LTris-硼酸，10mmol/LEDTA，pH值8.0。使用時(shí)將上述儲(chǔ)存液稀釋10倍至0.5×TBE緩沖液，可同時(shí)作為電泳及制膠用的緩沖液。

    二、制膠
    1.根椐制膠量及凝膠濃度，在加有一定量的電泳緩沖液的三角錐瓶中，加入準(zhǔn)確稱量的瓊脂糖粉（總液體量不宜超過(guò)錐瓶的50%容量）。瓊脂糖粉末與0.5×TBEbuffer的比例（w：v）參考表1，常用瓊脂糖濃度為0.7-1%。表1瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的*分辨范圍瓊脂糖濃度*線形DNA分辨范圍

（bp）0.50%1000～300000.7%800～120001%500～100001.20%400～70001.50%200～30002%50～20002%～5%20～1000

    2.在錐瓶的瓶口上蓋上保鮮膜或牛皮紙，并在膜或紙上扎些小孔，然后在微波爐中加熱溶解瓊脂糖。加熱時(shí)，當(dāng)溶液沸騰后，請(qǐng)戴上防熱手套，小心搖動(dòng)錐瓶，使瓊脂糖充分均勻溶解。此操作重復(fù)數(shù)次，直至瓊脂糖*溶解。

    3.使溶液冷卻至50℃-60℃左右，如需要可在此時(shí)加入溴化乙錠溶液（終濃度0.5μg/ml）或按照1μL/30mL的比例加入DNAgreen染料，并充分混勻。

    4.將瓊脂糖溶液倒入制膠模中，然后在適當(dāng)位置處插上梳子。凝膠厚度一般在3~5mm之間。制膠模如下圖所示，小膠倒入25-30mL左右瓊脂糖溶液，大膠則60-70mL左右，若需切膠回收，凝膠可適當(dāng)加厚。

    5.在室溫下使膠凝固，大約30分鐘~1小時(shí)。

    三、上樣

    1.取適量樣品與6×上樣緩沖液混勻（如：1μl樣品與5μl6×上樣緩沖液），用微量移液槍小心加入樣品槽中。

    2.上樣量根據(jù)樣品濃度可適當(dāng)調(diào)整，若DNA含量偏低，則可依上述比例增加上樣量，但總體積不可超過(guò)樣品槽容量（一般小孔40μl為上限，大孔200μl為上限，具體和制膠膜規(guī)格相關(guān)）。

    3.每加完一個(gè)樣品要更換槍頭，以防止互相污染，注意上樣時(shí)要小心操作，避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。

    四、電泳
    1.加完樣后，合上電泳槽蓋，立即接通電源?？刂齐妷罕３衷?10V，電流在40mA以上。
    2.當(dāng)條帶移動(dòng)到距凝膠前沿約2cm時(shí)（約40min），停止電泳。
    3.紫外下拍照并觀察